ProMab 단백질 발현 및 생산 서비스

ProMab Biotechnologies는  20여년 동안 항체 개발 CRO 업체로서 단백질 발현 및 정제 서비스에 대한 풍부한 노하우를 갖고 있습니다. ProMab은 다양한 숙주 시스템에서 재조합 단백질을 생산하기 위한 포괄적인 단백질 발현 및 정제 서비스를  제공합니다. 

​▶ 서비스 종류

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1. E.coli 발현 서비스

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Phase I.

Subcloning into Expression Vector

  • 관심 유전자 (gene of interest)의 증폭/분리 및 His-Tag (또는 GST-tag)를 사용하여 적절한 벡터로 서브클로닝

  • 삽입 서열 확인

  • 표적 단백질을 과발현 시키기 위한 mini-induction

  • SDS-PAGE 및 Western Blot(고객이 이 결과를 원하실 경우, 관심 단백질 (protein of interest)에 대한 적절한 항체를 제공해야 함)으로 재조합 단백질을 테스트

  • 예상 소요시간: 3-5 주

Phase II.

Expansion and Purification

  • 1L의 박테리아 배양약은 IPTG로 induction하며, 단백질 정제를 위해 수확합니다.

  • Native 또는 denatured 조건에서 비드를 사용하여 GST-tag 단백질을 6X His-tag 또는 glutathione을 가지고 Ni-NTA 정제를 합니다.

  • 예상 소요시간: 2 주

Deliverables

  • 5 ㎍ transfer vector

  • 재조합 단백질

  • 문서

  • 수득율은 0.5 ~ 50 mg/L의 배양액이며, 평균 수득율은 3 mg/L 입니다. 단, 용해도는 보장하지 않습니다.

ProMab Biotechnologies의 높은 수준의 재조합 단백질 E.coli 발현 서비스는 고객의 니즈에 따라 발현 규모의 확장, 태그 제거, 빠른 전환 시간 및 합리적인 가격으로 제공됩니다. E.coli 발현 시스템은 고유의 장점으로 재조합 단백질 생산에 가장 널리 사용되고 있습니다.

  • 합리적인 세업 및 운영 비용

  • 높은 수준의 재조합 단백질 생산

  • 클로닝에서 단백질 회수까지의 짧은 타임라인

  • 배양에 필요한 제한된 기술 지식

  • 소량 (1mL)에서 대량 생산(>10,000L)까지 규모를 확장

E.coli 발현 서비스는 서브 클로닝에서 발현 및 정제까지 6~8 주 소요됩니다.

 

E.coli 발현 서비스는 다음과 같은 과정으로 진행됩니다.

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2. Baculovirus 발현 서비스

ProMab Biotechnologies의 Baculovirus 발현 서비스의 특징

  • 경쟁력 있는 가격

  • 높은 수준의 발현 시스템

  • 클로닝에서 단백질 회수까지의 짧은 타임라인

Baculovirus 발현 시스템은 박테리아 발현 시스템, 특히 복잡한 번역 후 변형과정이 필요한 것과 비교하여 많은 양의 재조합 단백질을 생산하며, 빠르고 비용 효율적인 방법으로 알려져 있습니다. ProMab의 서비스는 다른 서비스와 다릅니다.

  • 분자적 클로닝 및 발현을 위한 효과적인 전략을 개발하며,

  • 다양한 baculovirus 전달 벡터를 사용하여 고객 맞춤형 또는 대용량 클로닝을 수행하며,

  • 최적의 발현 조건을 결정하기 위한 소규모의 일시적 발현 스크리닝을 진행하며,

  • Shake flask 및 WAVE 생물 반응기에서 대규모 일시적 발현을 수행합니다.

곤충세포/baculovirus 발현 벡터 시스템 (BEVS)은 재조합 단백질을 생산하기 위해 점점 더 대중화되고 있습니다. 이 시스템은 아래와 같은 몇가지 장점을 제공합니다.

  • 복잡한 번역후 변형(post translational modifications) 과정을 수행할 수 있으며,

  • 수용성 단백질을 높은 수득률로 회수할 수 있으며,

  • 큰 단백질 복합체의 생산에 적합하며,

  • ​다른 고등 진핵생물에 비해 높은 수준으로 단백질을 발현할 수 있습니다.

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Phase I.

Transfection of sf9 insect cells

  • 관심 유전자 (gene of interest)의 증폭/분리 및 His-Tag (또는 GST-tag)를 사용하여 전달 벡터로 서브클로닝

  • 삽입 서열 확인

  • Baculoviral DNA의 형질전환은 GOI (관심유전자)을 포함한 E.coli로 형질 전환시켜 재조합 bacmid/GOI DNA를 생성합니다.

  • 예상 소요시간: 2-3 주

Phase II.

  • 대장균의 소규모 배양 및 재조합 bacmid (recombinant viral DNA)를 추출

  • 재조합 baculovirus를 생산하기 위해 재조합 bacmid를 sf9 곤충세포에 transfection

  • 필요할 경우, 발현 수준 및 후속 과정의 최적화를 검증하기 위한 소규모 배양

  • 예상 소요시간: 3-4 주

Phase III.

Large Scale Transfection and Purification

  • 바이러스 stock 준비

  • 단백질 발현을 위한 sf9 곤충세포의 대규모 배양 및 감염

  • ​친화성 정제 컬럼을 사용하여 감염된 sf9 세포 1L에서 단백질 정제

  • 예상 소요시간: 3-4 주

Deliverables

  • 5 ㎍ transfer vector

  • Bacmid

  • 재조합 바이러스

  • 단백질

  • 문서

  • 수득율은 0.2 ~ 50 mg/L의 배양액이며, 평균 수득율은 3 mg/L 입니다. 

Baculovirus Expression

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3. Mammalian 발현 서비스

ProMab Biotechnologies의 Mammalian 발현 서비스의 특징

  • 높은 수준의 발현 시스템

  • 경쟁력 있는 가격

  • 빠른 처리 시간

  • 많은 당쇄를 가진 human cell line 기원

  • 50 L까지 발현량을 확장

  • 필요에 따라 tag 제거

​단계별 표준 서비스 분류

Phase I.

  • His-tag 이나 IgG-Fc tag(human or murine)를 사용하여 관심 유전자를 벡터에 클로닝

  • ​삽입 서열 확인

  • 발현 수준을 테스트하기 위해 소규모(10 mL)로 형질전환; 그리고 필요할 경우 후속 과정의 최적화를 검정할 목적으로 소규모 형질전환

  • 예상 소요시간: 3-4 주

Phase II.

  • 중간 규모 (50 mL)의 형질전화 및 단백질 정제

  • SDS-PAGE를 통한 검증

  • 예상 소요시간: 2-3주

Phase III.

  • HEK293 또한 CHO 세포에 재조합 벡터의 대규모 형질전환(500 mL) 및 단백질 발현, 평가 및 최적화

  • Ni-NTA 또는 단백질 G 친화성 정제 컬럼(추가 비용으로 tag 절단 가능)을 사용하여 500 mL의 HEK293 또는 CHO 세포 배양에서 단백질 정제

  • 예상 소요시간: 4 주

Deliverables

  • 5 ㎍ transfer vector

  • 단백질

  • 문서

  • 수득율은 0.2 ~ 25 mg/L의 배양액이며, 평균 수득율은 3 mg/L 입니다. 

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