比较 Protein A 填料时的考察项目

条件一致才能比较

Protein A 亲和层析是单克隆抗体捕获工艺的标准，但填料价格昂贵、寿命有限这一点一直被视为课题。[7][13]已公开的结合载量所用的抗体和保留时间各不相同，仅把数字并排放在一起无法构成比较。[1][5]

动态结合载量

动态结合载量（dynamic binding capacity，DBC）是在实际流动上样的条件下填料所捕获的抗体量。该值在很大程度上取决于保留时间（residence time），也因抗体种类和填料而异。[1][2]通常以上样至流出液 UV 信号达到最大值的 10% 的时间点（10% 穿透）为止的上样量来计算。[4][5]因此，应在保留时间和穿透标准相同、并且尽可能用本企业料液测得的数值之间进行比较。

基质与粒径

基质（base matrix）分为玻璃·硅胶类、琼脂糖类和合成聚合物类。[1]在一项比较 15 种市售填料的研究中，对保留时间的依赖性因基质而异，该研究以颗粒直径和传质速率解释了这一差异。[2]粒径和可压缩性会影响柱床高度的设计，因此压力-流速特性也应一并确认。[1][6]

耐清洗性与寿命

在位清洗（cleaning-in-place，CIP）使用氢氧化钠（NaOH）。据综述，琼脂糖类和聚合物类填料可用稀 NaOH（0.05~0.2 N，接触 30 分钟）进行消毒，耐碱稳定化配基可耐受 0.1~0.5 N。[1][7]重复使用次数据报道为 100~200 次以上，[1][7]但反复使用会使配基降解、流失，结合载量下降。[4][7]寿命受清洗溶液和料液的影响，因此应以实际料液进行重复循环试验来确定。[1][7]

杂质与洗脱条件

• 脱落 Protein A（leached Protein A）：指配基随抗体一同被洗脱的现象，属于工艺相关杂质。[8][15]用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定，[8][9]并在其后的离子交换步骤中去除。[1][8]
• 洗脱 pH：洗脱需要低 pH（2.5~4），而这一条件可能引起抗体聚集。[1][10]各填料的洗脱 pH 和聚集体比例应一并考察。[1][6]
• 宿主细胞蛋白（host cell protein，HCP）：相当一部分在 Protein A 步骤中被去除，但残留量因填料、料液和淋洗条件而异。[1][11]既有填料之间差异大的报道，也有差异小的报道。[3][6]

成本与法规文件

填料成本不按每升价格，而按反映结合载量、重复使用次数和年批次数的每 g 抗体成本来衡量，是合理的做法。[7][12]

确认供应商是否有法规支持文件（regulatory support file），如果正在准备美国上市申请，则确认能否取得药物主文件（Drug Master File，DMF）的引用授权书。[17][18]获批后更换填料材质属于纯化工艺变更。[14][16]ICH Q5E（2004年 Step 4，现行）认为变更前后的产品不必完全相同，但必须高度相似，并规定应以质量属性分析、杂质去除能力、工艺控制和稳定性资料证明这一点。[14][19]

参考来源