Aspectos a considerar al comparar resinas de Proteína A

Solo se puede comparar si se igualan las condiciones

La cromatografía de afinidad con proteína A es el estándar de la etapa de captura de anticuerpos monoclonales, pero el elevado precio de la resina y su vida útil limitada siguen señalándose como retos.[7][13] Las capacidades de unión publicadas se obtuvieron con anticuerpos y tiempos de residencia diferentes, por lo que no pueden compararse con solo poner las cifras una junto a otra.[1][5]

Capacidad dinámica de unión

La capacidad dinámica de unión (dynamic binding capacity, DBC) es la cantidad de anticuerpo que la resina retiene en condiciones en las que el líquido fluye realmente. Este valor depende en gran medida del tiempo de residencia (residence time) y también varía según el tipo de anticuerpo y la resina.[1][2] Normalmente se calcula como la cantidad cargada hasta el momento en que la señal UV del efluente alcanza el 10% de su valor máximo (ruptura del 10%).[4][5] Por lo tanto, se comparan entre sí valores con el mismo tiempo de residencia y el mismo criterio de ruptura y, si es posible, medidos con la alimentación propia.

Matriz base y tamaño de partícula

La matriz base (base matrix) se divide en tipos a base de vidrio o sílice, a base de agarosa y a base de polímeros sintéticos.[1] En un estudio que comparó 15 resinas comerciales, la dependencia del tiempo de residencia difirió según la matriz base, y esa diferencia se explicó por el diámetro de partícula y la velocidad de transferencia de masa.[2] El tamaño de partícula y la compresibilidad influyen en el diseño de la altura del lecho, por lo que también se verifican las características de presión-caudal.[1][6]

Resistencia a la limpieza y vida útil

Para la limpieza in situ (cleaning-in-place, CIP) se utiliza hidróxido de sodio (NaOH). Según artículos de revisión, las resinas a base de agarosa y de polímeros pueden sanitizarse con NaOH diluido (0.05~0.2 N, 30 minutos de contacto), y los ligandos estabilizados frente a álcalis soportan 0.1~0.5 N.[1][7] El número de reutilizaciones notificado es de 100~200 o más,[1][7] pero con el uso repetido el ligando se degrada y se pierde, y la capacidad de unión disminuye.[4][7] La vida útil depende de la solución de limpieza y de la alimentación, por lo que se establece mediante ensayos de ciclos repetidos con la alimentación real.[1][7]

Impurezas y condiciones de elución

• Proteína A lixiviada (leached Protein A): fenómeno por el cual el ligando eluye junto con el anticuerpo; corresponde a una impureza relacionada con el proceso.[8][15] Se mide mediante ensayo de inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA),[8][9] y se elimina en la etapa de intercambio iónico posterior.[1][8]
• pH de elución: la elución requiere un pH bajo (2.5~4), y esta condición puede provocar la agregación del anticuerpo.[1][10] Se consideran conjuntamente el pH de elución y el porcentaje de agregados de cada resina.[1][6]
• Proteínas de la célula huésped (host cell protein, HCP): una parte considerable se elimina en la etapa de proteína A, pero la cantidad residual varía según la resina, la alimentación y las condiciones de lavado.[1][11] Hay tanto informes de que las diferencias entre resinas fueron grandes como informes de que fueron pequeñas.[3][6]

Coste y documentos regulatorios

Es razonable valorar el coste de la resina no por el precio por litro, sino por el coste por g de anticuerpo, que refleja la capacidad de unión, el número de reutilizaciones y el número de lotes anuales.[7][12]

Se verifica si el proveedor dispone de un expediente de apoyo regulatorio (regulatory support file) y, si se prepara la autorización en Estados Unidos, si puede obtenerse la carta de autorización para hacer referencia al archivo maestro de medicamentos (Drug Master File, DMF).[17][18] Cambiar el material de la resina después de la autorización constituye un cambio del proceso de purificación.[14][16] ICH Q5E (Step 4 de 2004, vigente) considera que los productos anterior y posterior al cambio no tienen que ser idénticos, pero sí muy similares, y dispone que esto se demuestre con el análisis de los atributos de calidad, la capacidad de eliminación de impurezas, los controles de proceso y los datos de estabilidad.[14][19]

Fuentes