Protein A 레진을 비교할 때 보는 항목

조건을 맞춰야 비교가 됩니다

Protein A 친화 크로마토그래피는 단일클론항체 포획 공정의 표준이지만, 레진 값이 비싸고 수명이 한정되어 있다는 점이 계속 과제로 꼽힙니다.[7][13] 공개된 결합 용량은 시험한 항체와 체류 시간이 서로 달라, 숫자만 나란히 놓아서는 비교가 되지 않습니다.[1][5]

동적 결합 용량

동적 결합 용량(dynamic binding capacity, DBC)은 실제로 액을 흘리는 조건에서 레진이 붙잡는 항체량입니다. 이 값은 체류 시간(residence time)에 크게 좌우되고, 항체 종류와 레진에 따라서도 달라집니다.[1][2] 보통 유출액의 UV 신호가 최대값의 10%에 이르는 시점(10% 파과)까지 부하한 양으로 계산합니다.[4][5] 따라서 체류 시간과 파과 기준이 같고, 가능하면 자사 공급액으로 잰 값끼리 비교합니다.

기재와 입자 크기

기재(base matrix)는 유리·실리카계, 아가로스계, 합성 고분자계로 나뉩니다.[1] 시판 레진 15종을 비교한 연구에서는 기재에 따라 체류 시간 의존성이 달랐고, 그 차이를 입자 지름과 물질 전달 속도로 설명했습니다.[2] 입자 크기와 압축성은 충전 높이 설계에 영향을 주므로 압력-유속 특성도 함께 확인합니다.[1][6]

세척 내성과 수명

정치 세척(cleaning-in-place, CIP)에는 수산화나트륨(NaOH)을 씁니다. 종설에 따르면 아가로스계와 고분자계 레진은 묽은 NaOH(0.05~0.2 N, 접촉 30분)로 소독할 수 있고, 알칼리 안정화 리간드는 0.1~0.5 N을 견딥니다.[1][7] 재사용 횟수는 100~200회 이상으로 보고되지만,[1][7] 반복해서 쓰면 리간드가 분해·손실되고 결합 용량이 떨어집니다.[4][7] 수명은 세척 용액과 공급액의 영향을 받으므로 실제 공급액으로 반복 사이클 시험을 해서 정합니다.[1][7]

불순물과 용출 조건

• 유출 Protein A(leached Protein A): 리간드가 항체와 함께 용출되는 현상으로, 공정 유래 불순물에 해당합니다.[8][15] 효소결합면역흡착법(ELISA)으로 측정하고,[8][9] 뒤따르는 이온교환 단계에서 제거합니다.[1][8]
• 용출 pH: 용출에는 낮은 pH(2.5~4)가 필요하며, 이 조건이 항체 응집을 일으킬 수 있습니다.[1][10] 레진별 용출 pH와 응집체 비율을 함께 봅니다.[1][6]
• 숙주세포 단백질(host cell protein, HCP): Protein A 단계에서 상당 부분이 제거되지만, 잔류량은 레진, 공급액, 세척 조건에 따라 달라집니다.[1][11] 레진 간 차이가 컸다는 보고와 작았다는 보고가 모두 있습니다.[3][6]

비용과 규제 문서

레진 비용은 리터당 가격이 아니라 결합 용량, 재사용 횟수, 연간 배치 수를 반영한 항체 g당 비용으로 따지는 것이 합리적입니다.[7][12]

공급사에 규제 지원 문서(regulatory support file)가 있는지 확인하고, 미국 허가를 준비한다면 의약품 마스터 파일(Drug Master File, DMF) 참조 허가서를 받을 수 있는지 확인합니다.[17][18] 허가 후 레진 재질을 바꾸는 것은 정제 공정 변경에 해당합니다.[14][16] ICH Q5E(2004년 Step 4, 현행)는 변경 전후 제품이 똑같을 필요는 없으나 매우 유사해야 한다고 보며, 품질 특성 분석, 불순물 제거 능력, 공정 관리, 안정성 자료로 이를 보이도록 합니다.[14][19]

출처