Criterios de selección de una solución de criopreservación celular: aspectos a comprobar en la fabricación de terapias celulares

Función del medio de criopreservación y concentración de DMSO

El medio de criopreservación es una solución que contiene un crioprotector (cryoprotectant) que reduce el daño celular durante la congelación y la descongelación. El crioprotector más utilizado es el DMSO (dimethyl sulfoxide, dimetilsulfóxido); la concentración más habitual en la literatura es del 10% (v/v), y se ha descrito una tendencia a reducirla hasta el 5%.[1][2]

DMSO y reacciones a la infusión

En pacientes que recibieron la infusión de productos celulares con DMSO se han notificado reacciones gastrointestinales y cardiovasculares como escalofríos, náuseas y vómitos, y cambios en la presión arterial y el pulso.[2][5] Una revisión sistemática concluyó que estas reacciones son en su mayoría leves y transitorias y que están relacionadas con la dosis.[2][3] En el trasplante de células madre hematopoyéticas se cita 1 g de DMSO por 1 kg de peso corporal como límite superior generalmente aceptado, aunque, según la publicación, figura expresado «por infusión» o «por día».[2][4] El lavado posterior a la descongelación puede reducir el DMSO, pero conlleva riesgo de pérdida y daño celular.[2][5]

Suero y componentes de origen animal

La FDA de EE. UU. considera que los materiales de origen animal aumentan el riesgo de introducción de agentes adventicios (adventitious agent, microorganismos o virus que se incorporan de forma no intencionada) y que el suero presenta una gran variabilidad entre lotes, por lo que recomienda considerar, cuando sea posible, reactivos de origen no animal.[6][7] La notificación coreana también exige datos sobre el origen y la fuente de suministro de los materiales utilizados en el proceso de fabricación, así como la demostración de que los materiales de origen animal están libres de microorganismos adventicios.[8] Dado que incluso los productos etiquetados como sin suero (serum-free) pueden contener proteínas de origen humano o animal, como la albúmina, las indicaciones como libre de componentes xenogénicos (xeno-free) o químicamente definido (chemically defined) se verifican con los datos de composición.[7][9]

¿Material auxiliar o excipiente?

Los materiales que se utilizan en la fabricación pero que no se dejan en el producto final se clasifican como materiales auxiliares (ancillary material), y los componentes destinados a formar parte del producto final, como excipientes (excipient); la FDA cita el DMSO como ejemplo de excipiente.[6][10] Por lo tanto, si el medio de criopreservación permanece tal cual en la formulación final, se necesitan datos justificativos desde la perspectiva de excipiente.[10][11] Los documentos de referencia pertinentes son los siguientes.[6][8][12][13][14]

Calificación y documentación de apoyo regulatorio

La FDA recomienda presentar en una lista el grado y la procedencia de todas las materias primas y disponer de un programa de calificación (qualification) que demuestre la idoneidad para el uso previsto mediante certificados de análisis (COA), entre otros.[6][7] Si existe un archivo maestro (Drug Master File, DMF), en el que el proveedor presenta directamente a la FDA la información confidencial, puede hacerse referencia cruzada a él en la solicitud de nuevo fármaco en investigación (IND) tras obtener una carta de autorización (letter of authorization).[6][7]

Proceso de congelación y descongelación y su evaluación

Para las suspensiones de células somáticas se utiliza ampliamente un enfriamiento lento de aproximadamente 1 °C por minuto.[1][11] Para uso clínico se prefieren los congeladores programables de velocidad controlada (controlled-rate freezer), y los recipientes de enfriamiento pasivo que se colocan dentro de un congelador son principalmente para uso en investigación.[1][15] Se ha señalado que las células viables pueden disminuir aún más entre varias horas y varios días después de la descongelación.[1] La notificación coreana exige, para las células descongeladas de los bancos celulares, datos de identidad, ensayos funcionales, tasa de recuperación de células viables y ensayo de esterilidad.[8]

Envases, estabilidad y cambios en el suministro

• Envases: para uso terapéutico se emplean envases que se sellan herméticamente[1] y se revisa su compatibilidad con la formulación (adsorción y lixiviación).[6]
• Estabilidad: se necesitan estudios de estabilidad que especifiquen el envase de almacenamiento, la formulación y las condiciones de almacenamiento, así como datos del periodo de validez en congelación.[6][8]
• Cambios en el suministro: como un cambio de proveedor o de proceso puede afectar a la calidad, se establece un sistema para recibir por escrito y con antelación la notificación de los cambios.[7][12]

Fuentes