细胞冻存液选型要点：细胞治疗产品生产中的确认事项

冻存液的作用与 DMSO 浓度

冻存液是含有冷冻保护剂（cryoprotectant）的溶液，冷冻保护剂可减少冻融过程中的细胞损伤。应用最广泛的冷冻保护剂是 DMSO（dimethyl sulfoxide，二甲基亚砜），文献中最常见的浓度为 10%（v/v），并有将其降低至 5% 的趋势的报道。[1][2]

DMSO 与输注反应

在输注含 DMSO 细胞产品的患者中，一直有寒战、恶心呕吐、血压和脉搏变化等胃肠道和心血管系统反应的报道。[2][5]系统综述的结论是，这类反应大多轻微且短暂，并与给药量相关。[2][3]在造血干细胞移植中，每 1 kg 体重 DMSO 1 g 被引用为通常接受的上限，但不同文献分别以“每 1 次输注”或“1 日”为基准表述。[2][4]解冻后洗涤可以减少 DMSO，但伴随细胞损失和损伤的风险。[2][5]

血清与动物源性成分

美国 FDA 认为动物源性物质会增加引入外源因子（adventitious agent，非有意混入的微生物、病毒）的风险，且血清的批间差异大，因此建议尽可能考虑使用非动物源性试剂。[6][7]韩国的告示也要求提供生产过程中所用物质的起源和供应来源资料，以及动物源性物质不含外源微生物的证明。[8]标示为无血清（serum-free）的产品中也可能含有白蛋白等人源或动物源性蛋白质，因此无异源成分（xeno-free）、化学成分确定（chemically defined）等标示应以组成资料确认。[7][9]

是辅助材料，还是辅料

用于生产但不留在最终产品中的物质归为辅助材料（ancillary material），有意使其成为最终产品一部分的成分归为辅料（excipient），FDA 将 DMSO 列为辅料的示例。[6][10]因此，如果冻存液原样留在最终制剂中，则需要从辅料角度提供依据资料。[10][11]相关标准文件如下。[6][8][12][13][14]

确认与法规支持资料

FDA 建议列出所有原料的级别和来源，并建立通过检验报告书（COA）等证明其适用于预期用途的确认（qualification）计划。[6][7]如果有供应商将保密信息直接提交给 FDA 的主文件（Drug Master File，DMF），则可在取得授权书（letter of authorization）后在临床试验申请（IND）中交叉引用。[6][7]

冻融工艺与评价

对于体细胞悬液，广泛采用每分钟约 1 °C 的缓慢降温。[1][11]临床用途首选程序控速降温仪（controlled-rate freezer），放入冰箱中使用的被动式降温容器主要用于研究。[1][15]有观点指出，在解冻后数小时至数日内，活细胞可能进一步减少。[1]韩国的告示要求提供细胞库解冻细胞的鉴别、功能试验、活细胞回收率和无菌试验资料。[8]

容器、稳定性与供应变更

• 容器：治疗用途使用可密封的容器[1]，并审查其与制剂的相容性（吸附、溶出）。[6]
• 稳定性：需要注明储存容器、制剂和储存条件的稳定性试验以及冷冻有效期资料。[6][8]
• 供应变更：供应商或工艺发生变化可能影响质量，因此应建立事先以书面形式获得变更通知的机制。[7][12]

参考来源