細胞凍結保存液の選定基準：細胞治療製品の製造で確認する項目

凍結保存液の役割とDMSO濃度

凍結保存液は、凍結・解凍中の細胞損傷を軽減する凍結保護剤(cryoprotectant)を含む溶液です。最も広く用いられている凍結保護剤はDMSO(dimethyl sulfoxide、ジメチルスルホキシド)であり、文献で最も一般的な濃度は10%(v/v)で、5%まで下げようとする動きが報告されています。[1][2]

DMSOと輸注反応

DMSOを含む細胞製品の輸注を受けた患者において、悪寒、悪心・嘔吐、血圧・脈拍の変化といった消化器系・心血管系の反応が報告されてきました。[2][5] システマティックレビューは、こうした反応の大部分は軽度かつ一過性であり、投与量に関連すると結論づけました。[2][3] 造血幹細胞移植では、体重1 kgあたりDMSO 1 gが通常受け入れられている上限として引用されますが、文献によって「1回の輸注あたり」または「1日」基準で記載されています。[2][4] 解凍後の洗浄によってDMSOを減らすことはできますが、細胞の損失と損傷のリスクを伴います。[2][5]

血清・動物由来成分

米国FDAは、動物由来物質が外来性感染性物質(adventitious agent、意図せず混入する微生物・ウイルス)の混入リスクを高め、血清はバッチ間のばらつきが大きいとみなし、可能であれば非動物由来の試薬を検討するよう推奨しています。[6][7] 韓国の告示も、製造過程で用いる物質の起源・供給源に関する資料と、動物由来物質に外来性微生物が存在しないことの証明を求めています。[8] 無血清(serum-free)と表示された製品にもアルブミンのようなヒト・動物由来のタンパク質が含まれている場合があるため、ゼノフリー(xeno-free)やケミカリーディファインド(chemically defined)といった表示は組成資料で確認します。[7][9]

補助材料か、添加剤か

製造に用いられるものの最終製品に残さない物質は補助材料(ancillary material)、最終製品の一部となることを意図した成分は添加剤(excipient)として区別され、FDAはDMSOを添加剤の例として挙げています。[6][10] したがって、凍結保存液が最終製剤にそのまま残る場合は、添加剤の観点からの根拠資料が必要です。[10][11] 関連する基準文書は次のとおりです。[6][8][12][13][14]

適格性評価と規制対応支援資料

FDAは、すべての原料のグレードと供給元を一覧として提出し、試験成績書(COA)などによって用途への適合性を立証する適格性評価(qualification)プログラムを備えるよう推奨しています。[6][7] サプライヤーが機密情報をFDAに直接提出しておくマスターファイル(Drug Master File, DMF)があれば、授権書(letter of authorization)を得て臨床試験実施申請(IND)で相互参照することができます。[6][7]

凍結・解凍工程と評価

体細胞の懸濁液には、毎分約1 °Cの緩やかな冷却が広く用いられています。[1][11] 臨床用にはプログラム式の速度制御凍結装置(controlled-rate freezer)が好まれ、フリーザーに入れて使用する受動型の冷却容器は主に研究用です。[1][15] 解凍後、数時間から数日の間に生存細胞がさらに減少しうるとの指摘があります。[1] 韓国の告示は、セルバンクの解凍細胞について、確認試験、機能試験、生存細胞回収率、無菌試験の資料を求めています。[8]

容器、安定性、供給変更

• 容器：治療用には密封できる容器を使用し[1]、製剤との適合性(吸着・溶出)を検討します。[6]
• 安定性：保管容器・製剤・保管条件を明示した安定性試験と、凍結状態での有効期間の資料が必要です。[6][8]
• 供給変更：サプライヤーや工程が変わると品質に影響しうるため、変更について事前に書面で通知を受ける体制を整えます。[7][12]

出典