残留宿主細胞DNA・HCP試験基準：数値の出典と試験法の確認項目

なぜ試験するのか

細胞を用いて製造するバイオ医薬品には、生産細胞に由来するDNAとタンパク質が残留することがあります。ICH Q6Bは、宿主細胞由来タンパク質(HCP, host cell protein)と宿主細胞DNAを、細胞基材に由来する工程由来不純物(process-related impurity)に分類しています [1][9]。残留DNAは腫瘍原性の可能性と感染性のために [2][3]、HCPは製品の品質・有効性・安全性に影響しうるために管理します [8][9]。

残留DNA：数値の出典

出典：[2][3][4][5]

• 上記の数値はいずれも推奨(recommendation)であり、すべての製品に適用される単一の規定ではありません。WHOは、製品ごとの許容限度を、細胞基材の特性、用途、工程がDNAのサイズ・量・活性に及ぼす影響を考慮して、規制当局と協議のうえ定めることとしています [2]。
• 「約200 bp」は、FDAのガイダンスが機能遺伝子のサイズとして示した値です [3][4]。
• 腫瘍原性細胞(例：HEK293)を用いる場合は、より厳しい制限が必要となることがあります [3][4]。
• WHOは、精製が難しい一部の生ウイルスワクチンは10 ng/doseを超えることがあり、これは例外として規制当局と協議すべき事項であると述べています [2]。

HCP：一律の数値限度はありません

HCPに関するガイダンスは数値限度を示しておらず、許容水準は用量・投与経路などの臨床条件に応じて製品ごとに定めます [9][10]。欧州医薬品庁(EMA)のQ&Aは、HCP試験を通常は原薬の規格に含め、上限は臨床的に妥当性が確認された値とするよう案内しています [8]。HCP試験法の詳細は、欧州薬局方2.6.34と米国薬局方<1132>が扱っています [8][9][10]。

試験法

• 残留DNA：定量PCR(qPCR)が最も広く用いられています [7][11]。米国薬局方<509>は、CHOおよび大腸菌由来の組換え医薬品を対象に、qPCR測定法とその前段階の抽出手順を示しています [6][7]。
• HCP：複数のHCPを一度に測定する酵素免疫測定法(ELISA)が標準的な試験法です [9][12]。ELISAの抗体はすべてのHCPを認識できるわけではないため、個々のHCPを同定・定量できる液体クロマトグラフィー質量分析(LC-MS)を、直交(orthogonal、原理の異なる補完的な)試験法として併用します [9][12]。

試験法・キットを選ぶ際に確認する点

• 宿主特異性：生産細胞(CHO、大腸菌、HEK293、Veroなど)に合った試験であるか、他の種のDNAに反応しないかを確認します [6][11]。
• 感度と定量限界(LOQ)：1回投与量を基準とした目標限度より十分に低いかを確認します。FDAの1997年の文書は、10 pgレベルの感度を提案しました [5]。
• 抽出回収率：タンパク質の多い試料からDNAを抽出した後に測定するため、添加(spike)回収率で抽出効率を確認します [7][11]。
• 抗体カバレッジ(coverage)：ELISAの抗体が当該工程のHCPをどの程度幅広く認識するかを評価しなければなりません [8][9][10]。
• 汎用試験と工程特異的試験：汎用(generic)の市販キットは開発初期に広く用いられます。カバレッジが不足する場合は、プラットフォームまたは工程特異的(process-specific)ELISAを開発し、規制当局は通常、臨床第3相に入る前にこれを期待します [9][10]。

出典