残留宿主细胞 DNA·HCP 检测标准：数值的出处与检测方法核查项目

为什么要检测

用细胞生产的生物药中可能残留来自生产细胞的 DNA 和蛋白质。ICH Q6B 将宿主细胞蛋白（HCP，host cell protein）和宿主细胞 DNA 归类为源自细胞基质的工艺相关杂质（process-related impurity） [1][9]。对残留DNA进行控制是因为其潜在的致瘤性和感染性 [2][3]，对 HCP 进行控制是因为它可能影响产品的质量、有效性和安全性 [8][9]。

残留DNA：数值的出处

参考来源：[2][3][4][5]

• 上述数值均为建议（recommendation），并非适用于所有产品的单一规定。WHO 规定，各产品的可接受限度应在考虑细胞基质的特性、用途以及工艺对 DNA 的大小、数量和活性的影响的基础上，与监管机构协商确定 [2]。
• “约 200 bp”是 FDA 指南作为功能基因的大小提出的数值 [3][4]。
• 如果使用致瘤性细胞（例如 HEK293），可能需要更严格的限制 [3][4]。
• WHO 指出，某些难以纯化的活病毒疫苗可能超过 10 ng/dose，这属于例外情况，是需要与监管机构协商的事项 [2]。

HCP：没有统一的数值限度

HCP 相关指南未给出数值限度，可接受水平根据剂量、给药途径等临床条件按产品逐一确定 [9][10]。欧洲药品管理局（EMA）的问答文件指出，HCP 检测通常纳入原料药质量标准，上限应定为已在临床上确认合理性的数值 [8]。HCP 检测方法的具体内容见欧洲药典 2.6.34 和美国药典 <1132> [8][9][10]。

检测方法

• 残留DNA：定量 PCR（qPCR）应用最为广泛 [7][11]。美国药典 <509> 针对 CHO 和大肠杆菌来源的重组药品，提供了 qPCR 测定方法及其之前的提取步骤 [6][7]。
• HCP：可一次测定多种 HCP 的酶联免疫吸附测定法（ELISA）是标准检测方法 [9][12]。由于 ELISA 抗体并不能识别所有 HCP，因此将可鉴定和定量单个 HCP 的液相色谱-质谱联用（LC-MS）作为正交（orthogonal，原理不同的互补）检测方法一并使用 [9][12]。

选择检测方法和试剂盒时的确认要点

• 宿主特异性：确认检测是否与生产细胞（CHO、大肠杆菌、HEK293、Vero 等）相匹配，是否不与其他物种的 DNA 发生反应 [6][11]。
• 灵敏度和定量限（LOQ）：确认其是否充分低于按 1 次给药剂量计的目标限度。FDA 1997年的文件建议灵敏度达到 10 pg 水平 [5]。
• 提取回收率：由于是从蛋白质含量高的样品中提取 DNA 后再测定，因此用加标（spike）回收率确认提取效率 [7][11]。
• 抗体覆盖率（coverage）：必须评估 ELISA 抗体对该工艺的 HCP 的识别范围有多广 [8][9][10]。
• 通用型与工艺特异性检测：通用型（generic）市售试剂盒在开发早期被广泛使用。覆盖率不足时，则开发平台型或工艺特异性（process-specific）ELISA，监管机构通常期望在进入 3 期临床之前完成 [9][10]。

参考来源